Somos una comunidad cofinanciada por ERA PerMed de investigadores de todo el mundo con el objetivo de Explorar y explotar los mecanismos moleculares del tumor cerebral más agresivo y frecuente Glioblastoma multiforme (GBM). Los pacientes a los que se les diagnostica un GBM tienen un pronóstico muy malo. Sólo menos del 5% sobrevive más de cinco años. Y más del 90% sufren una recidiva, aunque se hayan sometido a cirugía, radio y quimioterapia. Para asegurarnos de reconocer la recidiva del GBM a tiempo, de modo que los pacientes puedan recibir una segunda cirugía que les prolongue la vida en el momento adecuado, nos centramos en la comparación del GBM inicial y el recurrente. De este modo, podemos definir posibles biomarcadores y objetivos terapéuticos.
Nuestro proceso comienza en Marburgo (Prof. Dr. Jörg-Walter Bartsch, Universidad Philipps de Marburgo). Aquí se extrae sangre de los pacientes tras su consentimiento informado y por escrito, antes y después de la cirugía. Almacenamos las muestras de sangre junto con las muestras de tejido tumoral de la cirugía a -80 °C después de congelarlas con nitrógeno líquido. Junto con la documentación de los datos de los pacientes, dirigimos nuestro biobanco desde 2012. Con esto, reunimos una cohorte de pacientes de 60 individuos (retrospectiva) y un número creciente de pacientes con la recolección de sangre adicional entre las cirugías (prospectiva). Esto constituye la base de nuestra variedad de análisis diferentes. Para el análisis basado en proteínas, Marburg envió una pequeña cantidad (100 µl) de suero sanguíneo y un trozo (~ 1 cm3) de tejido tumoral en hielo seco a Friburgo (Prof. Dr. Oliver Schilling, Universidad de Friburgo). Aquí se agotaron 14 proteínas de suero muy abundantes, por lo que no cubren las proteínas potencialmente importantes y específicas del cáncer (rango dinámico de la proteína de suero). Friburgo identificó y cuantificó una media de 812 grupos de proteínas en cada muestra de suero mediante espectrometría de masas por cromatografía líquida. Estas proteínas detectadas se compararon en grupos y se analizaron estadísticamente (agrupación jerárquica, análisis de componentes principales y modelización lineal). Curiosamente, cuatro proteínas implicadas en procesos de inflamación (proteínas de fase aguda) muestran una reacción a la cirugía. Y lo que es más interesante para nuestro objetivo de encontrar un panel de nuevos biomarcadores, se encontró que tres proteínas tenían una concentración más baja después de la cirugía. Nuestra hipótesis es que esas proteínas son de origen tumoral, ya que su abundancia disminuye tras la resección del tumor. De hecho, se sabe que son importantes en otras entidades tumorales. Al igual que en las muestras de tejido tumoral, se identificaron más de 5.000 proteínas que se cotejarán con los resultados recientes. Además, se está llevando a cabo el análisis de los controles (sangre de donantes sanos emparejados por edad y muestras de pacientes con epilepsia que fueron operados), así como de los posibles pacientes.
En otra cohorte de pacientes de nueve casos con GBM y la correspondiente recidiva, se identificaron especialmente tres proteínas enriquecidas en el tejido de la recidiva de GBM y se analizaron con más detalle. Aquí, Toronto (Dr. Hannes Röst, Universidad de Toronto) aportó su experiencia bioinformática en el análisis de datos y Bukarest (Dra. Violeta Anca Gafencu, Instituto de Biología Celular y Patología) contribuyó a los experimentos de biología molecular. Junto al enfoque basado en las proteínas, los mismos pacientes fueron analizados en Milán (Director Giovanni Tonon, IRCCS Ospedale San Raffaele) para conocer su composición de miRNAs. Los miRNAs son pequeños RNAs reguladores altamente implicados en el progreso de los tumores. Para ello, Marburg extrajo ARN enriquecido para miRNA del plasma, el suero y las vesículas extracelulares derivadas del suero. Las vesículas extracelulares son pequeñas partículas cerradas por una membrana que se sabe que se expresan en mayor medida en la sangre de los pacientes con GBM y que participan en diversos procesos que promueven los tumores. En Milán, se realizó la secuenciación de próxima generación para identificar los miRNAs desregulados. Realizando un análisis estadístico también en colaboración con Toronto, se reunió un enorme conjunto de miRNAs desregulados después de la primera cirugía y antes de la segunda. Una extensa búsqueda en la literatura correspondiente proporcionó una lista final de potenciales candidatos a biomarcadores (conjunto de 25) y se verificará ahora en otro lote de secuenciación con donantes de control, futuros pacientes y más pares de GBM (inicial y recurrente). Bukarest desarrolló, entre otras cosas, un flujo de trabajo para aislar varios tipos de células de los tejidos tumorales utilizando perlas magnéticas. De este modo, se ha podido realizar un análisis específico de cada tipo celular. En Valencia (Prof. Dr. Luis Marti-Bonmati, Hospital Universitario y Politécnico La Fe), los expertos en radioimagen seleccionaron 50 pacientes diagnosticados de GBM para su posterior análisis. Aquí se correlacionarán los datos de radioimagen con los parámetros clinicopatológicos.
Nuestra comunidad se destaca como un grupo de investigación multinacional, que se centra en la combinación de una variedad de enfoques para encontrar un conjunto de biomarcadores para predecir la fecha de recidiva del paciente. Especialmente al centrarnos en las recidivas del GBM, que ocurren casi siempre, logramos un impacto para entender esas recidivas y potencialmente tratarlas.
Texto reproducido de: https://www.youtube.com/watch?v=1FBjDYcTfZw